Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身上皮细胞到再次出现1M-肾病诊断腹泻的困难重重亲率在儿童时期就有很好的描绘出，多个胰脏自身上皮细胞非典型的儿童中所有70%在血清转换后10年末患上肾病，而随访15年的儿童这一%增高到84%。正因如此，占诊断1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的肺癌机制还并未得不到充分的深入研究。

更为多的人开始适用有系统系统来下定义1M-肾病的困难重重：个躯在再次出现多种胰脏自身上皮细胞时离开第1收尾，再次出现血糖诱发时离开第2收尾，再次出现腹泻时离开第3收尾。一些多发胰脏自身上皮细胞非典型的个躯，在1期和2期，困难重重较慢，并发展为肺癌的1M-肾病。我们在此之后描绘出了一分组在首次扫描到多种胰脏自身上皮细胞结果推断后至寡10年无肾病的很慢困难重重者，这分组病患人数寡，但不同之处非常说明。随后，我们发现胰脏自身上皮细胞特异性CD8+T中央线粒躯催化在困难重重很慢的病患中所必需不普遍存在，但在近期肺癌和长期普遍存在的肾病病患中所很容易扫描到。这可能说明了，与困难重重病患相比，这些病患自身免疫催化的闭环增强。

早期深入研究说明了，尽管闭环性T中央线粒躯(Treg)数量正常，但肾病病患普遍存在一些功能弱点，其中所包括对IL-2的催化能够增大。此外，肾病病患中所的效应CD4+T中央线粒躯可能对闭环更具抵抗性，乏善可陈为效应T中央线粒躯的消除增强，人为产生的Treg和躯外产生的其会Treg，以及上皮细胞漫长的CD4+T中央线粒躯中所IL-2催化增强。本深入研究的目的是描绘出了CD4+闭环性T中央线粒躯(Treg)在一小群极很慢困难重重者中所的不同之处，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的纵向深入研究，在21岁此表就诊的病患亲属中所安全检查1M-肾病的危险主因。我们在此之后描绘出了长期很慢困难重重者的不同之处，他们始终保持多重胰脏自身上皮细胞非典型超过10年，但并未再次出现肾病的诊断腹泻，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续始终保持无肾病并愿意缺少大量血液结果推断的很慢困难重重者确立T和B中央线粒躯功能分析。在目前的深入研究中所，8名慢困难重重者(SP分组)，中所位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身上皮细胞非典型。所有的自发性都正处于1M-肾病困难重重的1期，尽管一些人随后丧失了胰脏自身上皮细胞对某些上皮细胞的施打，然而，一名病患已经正处于2期至寡6年，但并未再次出现诊断腹泻，一名病患被诊断为肾病，该成年人72岁，在采集实验结果推断时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该酪氨酸顺利完成了单独评估。裂解外周血单个核中央线粒躯(PBMCs)，采用多值流式中央线粒躯妖术和T中央线粒躯消除实验评估酪氨酸中所Treg的Hz、表M-和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利完成无监督聚类分析，评估Treg表M-。

结果：与健康酪氨酸相比，来自慢困难重重躯的清醒CD4+T中央线粒躯的监督聚类推断，触发的清醒CD4+ TregHz增高，与糖皮质激素其会的TNFR关的上皮细胞(GITR)传达增高有关。一名HbA1c升高的病患与困难重重很慢者和最简单的对照分组相比，Treg谱有所相同。功能分析说明了，与健康酪氨酸相比，来自很慢困难重重躯的Treg介导的CD4+效应T中央线粒躯消除值得注意受损。乏善可陈为对效应CD4+T中央线粒躯CD25和CD134传达的消除增高。

上图1 深入的表M-分析推断，CD4+Treg亚M-在慢困难重重缓冲区中所增高。由FlowSOM作用于的Treg会议室，聚集在来自所有酪氨酸的活命CD4+CD45RA -中央线粒躯上。根据上标物传达解剖出10个元簇:清醒T中央线粒躯_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T中央线粒躯;HLA-DR + GITR +清醒T中央线粒躯;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)适用9个相同Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个终端代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较小的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端分组周围绘图。每个终端中所的煎饼上图问到单个上标的传达级别。(b)每个元聚类的热上图，以推断整躯上标传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于上图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说丰度为每个metacluster装入中央线上图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T中央线粒躯(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T中央线粒躯(l)。橘色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模M-证实，TregHz的增高是困难重重很慢的标志。这两项奈斯(a - f)和果树分析(g-k)比较SP自发性和最简单的HD自发性在CD4+CD45RA−T中央线粒躯上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的别具特色上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利完成裂解，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及酪氨酸SP 606(橘色)中所CD25+ cd127的Hz汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯有界的装入中央线上图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心着色，标记突出的簇被辨别为SP和HD缓冲区之间的相同。(j)装入中央线上图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说丰度(%)。(k)直方上图推断每个簇的表M-(蓝色)和Treg上标相对来说传达与剧中传达(蓝色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。剧中与所有其他簇中所上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

上图3 与健康献血者相比，困难重重很慢者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T中央线粒躯元簇(清醒T中央线粒躯_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T中央线粒躯;HLA-DR + GITR +清醒T中央线粒躯;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个传达上标的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的传达热上图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR传达相联，推断直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(蓝色)酪氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR传达，从这两项奈斯，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)相联，推断直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

上图4 来自很慢困难重重的CD4+ treg中央线粒躯控制效应CD4+T中央线粒躯的能够增大。SP分组用蓝色的中央线和圆圈问到，HD分组用黑色的中央线和圆圈问到，橘色的中央线/圆圈问到酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒躯顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上标为CFSE, Treg按掩蔽的%试样。用抗CD3 /28微珠激活命中央线粒躯，人才培养3天后顺利完成流式中央线粒躯妖术扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者相对来说应的treg人才培养(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE消除(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。适用非典型对照(触发的响应中央线粒躯不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 效应CD4+T中央线粒躯对很慢困难重重的T中央线粒躯激活命的消除更敏感。SP分组用蓝色的中央线和圆圈问到，HD分组用黑色的中央线和圆圈问到，橘色的中央线/圆圈问到酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒躯顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上标，treg按掩蔽的%试样。用抗CD3 /28微珠激活命中央线粒躯，人才培养3天后顺利完成流式中央线粒躯妖术(CD25反染)和中央线粒躯因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者携手人才培养。(a,b) CFSE消除(a)和CFSE消除百分亲率(b)。(c,d) CD25消除百分亲率(c)和CD134消除百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自很慢困难重重三子的激活命清醒CD4+Treg在GITR传达中所得不到了扩展到和丰富，阐释了进一步深入研究Treg在1M-肾病风险个躯中所的异质性的实质。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28