Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展比较慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肾脏自身HIV到消失1同型哮喘临床病症的重大突破所部在成人时期就有很好的刻画，多个肾脏自身HIV非典型的成人中所有70%在血清变换后10在短期内患上哮喘，而随访15年的成人这一比例降低到84%。来得之下，分之一临床1同型哮喘一半以上的同型1同型哮喘的发病机制还不会给予充分的研究者。

越发多的人开始用作仍须系统来并不一定1同型哮喘的重大突破：性状在消失多种肾脏自身HIV时转至第1之前，消失血糖显现出现异常时转至第2之前，消失病症时转至第3之前。一些多发肾脏自身HIV非典型的性状，在1期和2期，重大突破较慢，并转型为发病的1同型哮喘。我们在此之前刻画了一四组在首次侦测到多种肾脏自身HIV结果显示后仅仅10年无哮喘的极慢重大突破者，这四组病症数量少，但特征非常明确。随后，我们发现肾脏自身抗原基因表达CD8+T巨噬细胞反应在重大突破较快的病症中所基本不存在，但在现阶段发病和肇因的哮喘病症中所很容易侦测到。这可能暗示，与重大突破病症来得，这些病症自身免疫反应的调节增强。

早期研究者暗示，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)比例也就是说，但哮喘病症存在一些基本功能缺陷，其中所包括对IL-2的反应潜能降低。此外，哮喘病症中所的波动CD4+T巨噬细胞可能对调节不具抵抗性，展现显现出为波动T巨噬细胞的依赖性减弱，自然造成了的Treg和排泄造成了的抑止Treg，以及抗原历程的CD4+T巨噬细胞中所IL-2反应减弱。本研究者的目的是刻画了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在领头极较快重大突破者中所的特征，他们的总数量为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方式：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁都有确诊的病症亲友中所检查1同型哮喘的危险因素。我们在此之前刻画了长期较快重大突破者的特征，他们保持多重肾脏自身HIV非典型超过10年，但不会消失哮喘的临床病症，慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名在此之后保持无哮喘并愿意包括大量血液结果显示的较快重大突破者纳入T和B巨噬细胞基本功能深入研究者。在现有的研究者中所，8名慢重大突破者(SP四组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身HIV非典型。所有的参与者都西北面1同型哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后得不到了肾脏自身HIV对某些抗原的非典型反应，然而，一名病症已经西北面2期仅仅6年，但不会消失临床病症，一名病症被诊断为哮喘，该受试者72岁，在搜集试验中结果显示时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究者中所对该丝氨酸来进行了除此以外审核。复合外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞依赖性试验审核丝氨酸中所Treg的频所部、表同型和基本功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和转回)来进行无监督聚类深入研究者，审核Treg表同型。

结果：与健康丝氨酸来得，来自慢重大突破躯的无意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类推测，激光阴的无意识CD4+ Treg频所部降低，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)特别强调降低有关。一名HbA1c升温的病症与重大突破较快者和也就是说的印证四组来得，Treg可知有所不尽相同。基本功能深入研究者暗示，与健康丝氨酸来得，来自较快重大突破躯的Treg内皮细胞的CD4+波动T巨噬细胞依赖性明显受损。展现显现出为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134特别强调的依赖性降低。

布1 透彻的表同型深入研究者推测，CD4+Treg亚同型在慢重大突破表头中所降低。由FlowSOM生成的Treg会议室，涌进在来自所有丝氨酸的光阴CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示显现出物特别强调认定显现出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用作9个不尽相同Treg标示显现出生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点四组一处上色。每个节点中所的饼布透露单个标示显现出的特别强调级别。(b)每个元聚类的热布，以推测整躯标示显现出特别强调。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的很薄。(e-l)相对于金属量为每个metacluster箱子中央线布(金属量> 0.05%)明确为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。红色格子代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用作CITRUS的预测模同型证实，Treg频所部的降低是重大突破较快的徽章。标准依赖型(a - f)和大豆深入研究者(g-k)比较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的权威性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR特别强调来进行复合，精心设计FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)四组以及丝氨酸SP 606(红色)中所CD25+ cd127的频所部汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的箱子中央线布;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3特别强调强度纹理，箭头凸显的簇被识别为SP和HD表头相互间的不尽相同。(j)箱子中央线布推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)四组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于金属量(比例)。(k)直方布推测每个簇的表同型(粉红色)和Treg标示显现出相对于特别强调与背景特别强调(粉红色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇中所标示显现出的特别强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

布3 与健康献血者来得，重大突破较快者无意识treg的GITR降低。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个特别强调标示显现出的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的特别强调热布(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(黑色)、所有SP(粉红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR特别强调串联，推测直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(红色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(粉红色)丝氨酸SP 606和也就是说的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR特别强调，从标准依赖型，从所有HD(黑色)、所有SP(粉红色)和SP 606(红色)串联，推测直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

布4 来自较快重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制波动CD4+T巨噬细胞的潜能降低。SP四组用粉红色的中央线和格子透露，HD四组用黑色的中央线和格子透露，红色的中央线/格子透露丝氨酸sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示显现出为CFSE, Treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化巨噬细胞，指导3翌日来进行流式巨噬细胞法术侦测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg指导(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者指导。(a,b,f) CFSE依赖性(a,e)和CFSE依赖性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性一般而言。用作非典型印证(激光阴的响应巨噬细胞不含treg)算显现出依赖性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究者。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 波动CD4+T巨噬细胞对较快重大突破的T巨噬细胞光阴化的依赖性更敏感。SP四组用粉红色的中央线和格子透露，HD四组用黑色的中央线和格子透露，红色的中央线/格子透露丝氨酸sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示显现出，treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化巨噬细胞，指导3翌日来进行流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬细胞因子深入研究者。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同指导。(a,b) CFSE依赖性(a)和CFSE依赖性调升(b)。(c,d) CD25依赖性调升(c)和CD134依赖性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中所的特别强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究者。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们给显现出的结论是，来自较快重大突破子的光阴化无意识CD4+Treg在GITR特别强调中所给予了构建和丰富，特别强调了进一步研究者Treg在1同型哮喘风险性状中所的异质性的必要性。

原文显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28